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技術(shù)文章

植物精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒實驗步驟

點擊次數(shù):17010   發(fā)布時間:2022/12/26 11:57:39

 一、樣品預(yù)處理

1.準(zhǔn)備好新鮮的植物組織(葉片、谷粒、種子等),并秤重以確定 100 500 毫克組織重量

2.(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管

3.(選擇步驟)加入 xx 毫升清理液(Reagent A清洗 1

4.即刻用刀片切碎組織

5.放進(jìn)一個預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管

6.加入預(yù)冷的 xx 毫升裂解液(Reagent B

7.渦旋震蕩 5 秒,充分混勻

8.即刻放進(jìn)預(yù)冷的 DOUNCE 勻漿器,在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約 80 下)

9.將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管,放進(jìn) 4℃臺式離心機(jī)離心 10 分鐘,速度為 10000g

10.小心移出上清液到新的 15 毫升錐形離心管

11.移取 10 微升進(jìn)行蛋白定量檢測(注意:建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-G&VS30030.1

12.放進(jìn)冰槽里備用或放入70℃冰箱里保存

 

二、 測定準(zhǔn)備

1 設(shè)定好分光光度儀(溫度為 4℃):波長 500nm,并置零

2 準(zhǔn)備好 5 15 毫升錐形離心管,標(biāo)記為 1 5 號管

3 分別加入 xx 毫升預(yù)冷的清理液(Reagent A到每個離心管

4 移取 xx 毫升預(yù)冷的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F 1 號管,混勻

5 小心移取 xx 毫升 1 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F 2 號管,混勻

6 小心移取 xx 毫升 2 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F 3 號管,混勻

7 小心移取 xx 毫升 3 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F 4 號管,混勻

8 1 5 號管放進(jìn)冰槽里備用;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號

 

清理液(Reagent A   標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F   標(biāo)準(zhǔn)精氨酸含量

1 xx 毫升                 xx毫升           50微克/毫升

2 xx 毫升                 xx毫升         1號管25微克/毫升

3 xx 毫升                 xx毫升         2號管12.5微克/毫升

4 xx 毫升                 xx毫升         3號管 6.25微克/毫升

5 xx 毫升                 空對照                    0

 

三、 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定

1 移取 xx 毫升上述制備的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F到新的 15 毫升錐形離心管

2 加入 xx 微升反應(yīng)液(Reagent C,混勻

3 加入 xx 微升堿性液(Reagent D,混勻

4 置于冰槽里孵育 10 分鐘3

5 加入 xx 毫升冰槽里預(yù)冷的顯色液(Reagent E

6 快速槍頭混勻(注意:顯示磚紅色)

7 即刻移取 3 毫升到預(yù)冷的比色皿

8 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(500nm 波長),獲得吸光讀數(shù)(OD)(注意:須在 10 秒之內(nèi)測讀)

9 重復(fù)實驗步驟 1 8 四次

10.實際吸光讀數(shù):標(biāo)準(zhǔn)樣吸光讀數(shù)-5 號管標(biāo)準(zhǔn)樣吸光讀數(shù)(作為空對照)

11.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y 軸)為實際吸光讀數(shù)(OD);橫座標(biāo)(X 軸)為標(biāo)準(zhǔn)精氨酸含量(微克/毫升)

 

四、 樣品測定

1 移取 2.5 毫升上述制備的待測樣品到新的 15 毫升錐形離心管

2 加入 xx 微升反應(yīng)液(Reagent C,混勻

3 加入 xx 微升堿性液(Reagent D,混勻

4 置于冰槽里孵育 10 分鐘

5 加入 xx 毫升冰槽里預(yù)冷的顯色液(Reagent E

6 快速槍頭混勻(注意:顯示磚紅色)

7 即刻移取 3 毫升到預(yù)冷的比色皿

8 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(500nm 波長),獲得吸光讀數(shù)(OD)(注意:須在 10 秒之內(nèi)測讀)

9 實際吸光讀數(shù):樣品吸光讀數(shù)-5 號管標(biāo)準(zhǔn)樣吸光讀數(shù)(作為空對照)

10.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)精氨酸含量(微克/毫升)

 

五、 計算樣品實際含量

注意事項

1 本產(chǎn)品為 20 次操作

2 本產(chǎn)品檢測范圍 0 50 微克

3 操作時,須戴手套

4 試劑具有腐蝕性,注意操作安全

5 整個操作須在冰上操作

6 樣品測定避免批量一次操作,尤其是加入顯色液(Reagent E

7 系統(tǒng)操作過程中,標(biāo)準(zhǔn)樣品測定只需 1

8 如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品量

9 用戶可以使用:微克精氨酸/毫克蛋白或微克精氨酸/毫克組織等

10.本公司提供系列生化學(xué)檢測試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

 

產(chǎn)品編號                           名稱                               規(guī)格

G&VS19012.1    通用型精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19012.2    細(xì)胞精氨酸(arginine))含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒     20

G&VS19012.3    組織精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒      20

G&VS19012.4    血液精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19012.5    體液精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19012.6    植物精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19012.7    酒類精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19012.8    飲料精氨酸(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19229.1  通用型精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒  20

G&VS19229.2  細(xì)胞精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19229.3  組織精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19229.4  血液精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19229.5  體液精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19229.6  植物精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19229.7  酒類精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19229.8  飲料精氨酸(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.1    通用型精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.2    細(xì)胞精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.3    組織精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.4    血液精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.5    體液精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.6    植物精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.7    酒類精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

G&VS19230.8    飲料精氨酸(arginine)含量gao液相色譜法定量檢測試劑盒    20

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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