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試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存，臨用前加入 40mL 試劑一；
試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存，臨用前加入 2.5mL 試劑二；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 0.5mL×1 支，4℃保存。10μmol/mL 谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。
Glu 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸，而且通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源。此外，Glu 還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。
谷氨酸脫氫酶 (GDH) 催化谷氨酸和 NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和 NH4+ ，引起 340nm 處吸光度的上升，通過(guò)測(cè)定 340nm 吸光度的變化，計(jì)算谷氨酸含量。
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品：收集細(xì)胞或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞 (功率 20％，超聲 3s ，間隔 10s，重復(fù) 30 次)，10000rpm ，常溫離心 10min ，取上清待測(cè)。
稱取約 0. 1g 組織，加入 1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，10000 rpm，常溫離心 10min ，取上清待測(cè)。
1 、紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm ，蒸餾水調(diào)零。
2 、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
將標(biāo)準(zhǔn)品分別稀釋為 2.5 、1.25 、0.625 、0.313 、0. 156 、0.078 、0.039μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3 、在 1 mL 石英比色皿中加入下列試劑：
a.
標(biāo)準(zhǔn)管：在 1 mL 石英比色皿中加入 200μL 標(biāo)準(zhǔn)溶液、800μL 試劑三和 50μL 試劑四混勻，
立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值為 A1 和 5min20s 時(shí)的吸光值 A2 ，計(jì)算∆A=A2-A1。
b.
測(cè)定管：在 1 mL 石英比色皿中加入 200μL 樣本、800μL 試劑三和 50μL 試劑四混勻，立即
記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值為 A1 和 5min20s 時(shí)的吸光值 A2 ，計(jì)算∆A=A2-A1。
第 1 頁(yè) ，共 2 頁(yè)1 、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以谷氨酸含量 (µmol/mL) 為 x 軸，標(biāo)準(zhǔn)管∆A 為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=kx+b 。將測(cè)定管∆A 帶
入方程得到 x 值。
2 、氨基酸含量計(jì)算：
(1) 按照蛋白濃度計(jì)算
谷氨酸含量 (µmol/mg prot) =x×V 樣本÷ (Cpr×V 樣本) =x÷Cpr。
(2) 按照樣本鮮重計(jì)算
谷氨酸含量 (µmol/g 鮮重) =x×V 樣本÷ (W÷V 樣總×V 樣本) =x÷W。
(3) 按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
谷氨酸含量 (μmol/10 4 cell) ＝x×V 樣本÷ (500÷V 樣總×V 樣本) =0.002x。
V 樣總：加入提取液體積，1mL；V 樣本：加入的樣本體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本鮮重，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000 萬(wàn)。
為提高檢測(cè)靈敏度，測(cè)定管的吸光值應(yīng)小于 1 且∆A 小于 0.4 ，若大于此值則需要將上清液用試
劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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