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技術(shù)文章

ELISA背景深及全部呈有色原因是什么?

點(diǎn)擊次數(shù):18919   發(fā)布時(shí)間:2016/5/17 8:21:45

  五月初,清華大學(xué)的楊老師在我司購買了3個(gè)elisa試劑盒,前段時(shí)間,楊老師反饋ELISA背景深,全部呈有色,問是什么原因?希望能得到技術(shù)老師的解答。我司陳技術(shù)有著6年的ELISA酶聯(lián)免疫法的操作經(jīng)驗(yàn),有著豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)歷,為楊老師解答了心中的疑問,深受楊老師的贊揚(yáng)!就楊老師的問題,我司陳技術(shù)做了以下分析:

ELISA實(shí)驗(yàn)中,背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)

根據(jù)陳技術(shù)的分析,可能存在的原因有以下幾條:

 

1、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因:實(shí)驗(yàn)過程中洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留;

  解決辦法:洗液準(zhǔn)確配制;充分洗滌,靜置15秒,徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染。

2、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之二:底物污染,未避光保存,出現(xiàn)顏色;

解決辦法:棄去底物,重新配置

3、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之三:樣品稀釋液污染;

  解決辦法:棄去稀釋液,重新配置

4、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之四:吸頭重復(fù)使用,未洗凈或消毒不徹底;

  解決辦法:吸頭盡可能一次性使用

5、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之五:不正確的孵育時(shí)間,溫度(尤其是底物孵育的時(shí)間);

  解決辦法:*為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。完全按照說明書要求

6、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之六:偶聯(lián)抗體(streptavidin-HRP)濃度過高;

  解決辦法:按照說明書調(diào)整到*佳的濃度

7、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之七:板子不正確的貯存;

  解決辦法:酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃;使用結(jié)合力低點(diǎn)的Elisa板

8、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之八:沒有正確封閉;

  解決辦法:在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動(dòng)物蛋白或延長封閉時(shí)間

9、ELISA實(shí)驗(yàn)可能原因之九:樣本溶血嚴(yán)重;

  解決辦法:建議使用非溶血或輕微溶血樣本,嚴(yán)重溶血樣本會(huì)導(dǎo)致背景偏高。

一般上海情況下,ELISA實(shí)驗(yàn)中,背景深,全部呈有色的原因都一一列出來了!陳技術(shù)的表現(xiàn)讓楊老師很滿意!這次試驗(yàn)完成后,準(zhǔn)備下次再訂購2盒。

上海極威生物科技有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)各類ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,細(xì)胞及相關(guān)生物試劑的生物公司,公司產(chǎn)品豐富,種類齊全,價(jià)格實(shí)惠,售后完善!歡迎廣大科研學(xué)者前來選購!

 

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