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技術文章

ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制

點擊次數:18673   發(fā)布時間:2018/8/7 22:37:07

 一、elisa實驗中的封閉液小知識

ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:

1、ELISA實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;

2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。

4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經過BSA封閉后加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數選擇前者。封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結合上的明膠。封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結合抗體或抗原的時候就不會產生非特異結合了,不會影響實驗的準確度。

二、tween的作用:雖然不能單獨封閉,但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結合或結合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會出現YY-<yy的情況,在用tween后會出現yy p="">

三、附件:ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎,ELISA試劑以及各種溶液如何配置?*近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總如下:(1) ELISA實驗包被緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(3) ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。

試劑

(1) ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

NaHCO3需1.59克,NaHCO3需2.93克,加蒸餾水至1000ml

(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M

KH2PO4需0.2克,Na2HPO4·12H2O需2.9克,NaCl需8.0克,KCl需0.2克,Tween-20需0.05%需0.5ml,加蒸餾水至1000ml

(3) ELISA實驗稀釋液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克,加洗滌緩沖液至100ml,或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。

(4) ELISA實驗終止液(2M H2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

(5) ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml,0.1M 檸檬酸(19.2克/L)需24.3ml,加蒸餾水50ml。

(6) ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml,底物緩沖液(PH5.5)需10ml,0.75%H2O2 32μl

(7) ELISA實驗ABTS使用液:ABTS需0.5mg,底物緩沖液(PH5.5)需1ml,3%H2O2 2μl

(8)ELISA實驗封閉液:牛血清白蛋白(BSA) 5克,加洗滌緩沖液至100ml。

注:值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。

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為了保證ELISA實驗的準確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要精確,將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔,嚴防交叉污染。

關鍵詞:ELISA封閉液封閉劑緩沖液蔗糖抗體

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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