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技術(shù)文章

細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)-價(jià)格/說(shuō)明書(shū)-極威生物

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 細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

主要用途
細(xì)胞色素 P450 酶系(CYP-ECOD)總活性熒光定量檢測(cè)試劑是種旨在通過(guò)乙氧基香豆素脫乙基酶反應(yīng)系統(tǒng)中乙氧基香豆素轉(zhuǎn)化為羥基香豆素后熒光峰值的變化,即采用熒光法來(lái)測(cè)定樣品中酶系活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)或純化微粒體樣品細(xì)胞色素 P450 酶系的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。
細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)-價(jià)格/說(shuō)明書(shū)-GIVEI生物
技術(shù)背景
細(xì)胞色素P450酶是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能單加氧化酶系統(tǒng)的總稱。其分成五十多個(gè)亞酶:CYP1CYP51。作用在于體內(nèi)外源化合物(xenobiotics),包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝,即單加氧化作用monooxygenation)和羥化作用(hydroxylation)。乙氧基香豆素脫乙基酶(7-ethoxycoumarin O-deethylaseECOD)的活性是細(xì)胞色素P450酶系的診斷標(biāo)記,其基于ECOD廣泛性催化細(xì)胞色素P450亞酶的活性。乙氧基香豆素(7-ethoxycoumarin)在乙氧基香豆素脫乙基酶的催化下,轉(zhuǎn)化為羥基香豆素(7-hydroxycoumarin后熒光峰值的變化(激發(fā)波長(zhǎng)368nm,散發(fā)波長(zhǎng)456nm),來(lái)定量測(cè)定細(xì)胞色素P450酶系的活性。乙氧基香豆素脫乙基酶反應(yīng)系統(tǒng)為:
細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)-價(jià)格/說(shuō)明書(shū)-GIVEI生物
產(chǎn)品內(nèi)容
緩沖液(Reagent A)      毫升
反應(yīng)液(Reagent B)       微升
底物液(Reagent C      微升
終止液(Reagent D      毫升
標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E      微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)      1
細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)-價(jià)格/說(shuō)明書(shū)-GIVEI生物
保存方式
保存在-20℃冰箱里,反應(yīng)液(Reagent B)、底物液(Reagent C)和標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E)避免光照,終止液(Reagent D)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證 6
用戶自備
1.5 毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制和反應(yīng)的容器培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)200 微升 1 厘米光徑比色皿或黑色 96 孔板:用于熒光分析的容器熒光分光光度儀過(guò)熒光酶標(biāo)儀:用于熒光分析2
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始,將-20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。
、 測(cè)定準(zhǔn)備
1. 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如細(xì)胞裂解萃取液或微粒體樣品等),置于冰槽里
2. 設(shè)定好熒光分光光度儀(溫度為 37℃):激發(fā)波長(zhǎng) 370nm,散發(fā)波長(zhǎng) 450nm,并置零
3. 準(zhǔn)備好 5 個(gè) 1.5 毫升離心管,標(biāo)記為 1 5 號(hào)管
4. 分別加入 xx 微升緩沖液(Reagent A到每個(gè)離心管
5. 移取 xx 微升標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E1 號(hào)管,混勻
6. 小心移取 xx 微升 1 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E2 號(hào)管,混勻
7. 小心移取 xx 微升 2 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E3 號(hào)管,混勻
8. 小心移取 xx 微升 3 號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E4 號(hào)管,混勻
9. 將 1 5 號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表
管號(hào) 緩沖液(Reagent A) 標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E) 測(cè)定體系 標(biāo)準(zhǔn)羥基香豆素濃度
      xx 微升       xx 微升       xx 微摩爾/
2      xx 微升      xx 微升 1 號(hào)管      xx 微摩爾/      
3      xx 微升      xx 微升 2 號(hào)管      xx 微摩爾/      
4      xx 微升      xx 微升 3 號(hào)管      xx 微摩爾/      
5      xx 微升      空對(duì)照      0
二、 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定
1. 移取 xx 微升緩沖液(Reagent A1.5 毫升離心管
2. 加入 xx 微升反應(yīng)液(Reagent B
3. 加入 xx 微升底物液(Reagent C
4. 加入 20 微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)樣品
5. 上下傾倒數(shù)次,混勻
6. 在 37℃溫度下孵育 15 分鐘,避免光照
7. 加入 xx 微升終止液(Reagent D,混勻
8. 在 37℃溫度下孵育 5 分鐘,避免光照
9. 轉(zhuǎn)移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè),獲得相對(duì)熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU
11.實(shí)際熒光單位:標(biāo)準(zhǔn)樣相對(duì)熒光讀數(shù)-5 號(hào)管標(biāo)準(zhǔn)樣熒光讀數(shù)(作為空對(duì)照)
12.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y 軸)為實(shí)際相對(duì)熒光單位(RFU);橫座標(biāo)(X 軸)為標(biāo)準(zhǔn)羥基香豆素濃度(微摩爾/升)
三、 樣品測(cè)定1. 移取 xx 微升緩沖液(Reagent A1.5 毫升離心管
2. 加入 xx 微升反應(yīng)液(Reagent B
3. 加入 5 微升底物液(Reagent C
4. 加入 xx 微升待測(cè)樣品(20 微克微粒體蛋白或 100 微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)(注意:樣品須清澈
5. 上下傾倒數(shù)次,混勻
6. 在 37℃溫度下孵育 15 分鐘,避免光照
7. 加入 xx 微升終止液(Reagent D,混勻
8. 在 37℃溫度下孵育 5 分鐘,避免光照
9. 轉(zhuǎn)移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè),獲得相對(duì)熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU
11.實(shí)際熒光單位:樣品相對(duì)熒光讀數(shù)-5 號(hào)管標(biāo)準(zhǔn)樣熒光讀數(shù)(作為空對(duì)照)
12.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)羥基香豆素濃度(微摩爾/升)
四、 計(jì)算樣品實(shí)際活性
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為 25 次操作,包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定
2. 操作時(shí),須戴手套
3. 系統(tǒng)操作過(guò)程中,標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定只需 1
4終止液(Reagent D具有腐蝕性,注意操作安全
5. 樣品須澄清,至關(guān)重要(本公司提供細(xì)胞可溶性總蛋白質(zhì)制備試劑盒 GMS30002.1
6. 如果酶活性過(guò)低,可以增加孵育時(shí)間至 45 分鐘(37℃溫度下)
7. 熒光測(cè)定后,比色皿須清洗徹底
8. 建議待測(cè)樣本為微粒體,其蛋白濃度為 20 微克/100 微升;待測(cè)樣本為細(xì)胞懸液,其蛋白濃度為 100200 微克/100 微升(本公司提供 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒 GMS30030.1
9. 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低,可以調(diào)整樣品濃度
10.如果檢測(cè)血液樣品,建議使用體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
11.細(xì)胞色素 P450 酶系單位活性定義為:在 37℃,pH 7.5 條件下,每分鐘內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化 1 納摩爾乙氧基香豆素至羥基香豆素所需的酶量作為個(gè)活性單位
12.本公司提供系列毒理學(xué)檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感
使用承諾
秉著信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后 10 天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題,請(qǐng)立即以書(shū)面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
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編號(hào)            名稱                              規(guī)格
GMS18016.1      細(xì)胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒      25
GMS18016.1A      緩沖液(Reagent A                  毫升
GMS18016.1B      反應(yīng)液(Reagent B                  毫升
GMS18016.1C      底物液(Reagent C                  微升
GMS18016.1D      終止液(Reagent D                  毫升
GMS18016.1E      標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent E                  微升
試劑盒訂購(gòu)信息
產(chǎn)品編號(hào)                  名稱                        規(guī)格
GMS18001      細(xì)胞/組織 S9 組分分離試劑盒                        50
GMS18002      細(xì)胞/組織微粒體組分分離試劑盒                          50       
GMS18003      細(xì)胞色素 P450 酶體系濃度定量檢測(cè)試劑盒                  20
GMS18016.1      細(xì)胞色素 P450 酶(CYPECOD)總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒            20
GMS18016.2      體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素 P450 亞酶(CYPECOD)總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒      20

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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