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技術(shù)文章

細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書-價格/介紹-極威生物

點擊次數(shù):17270   發(fā)布時間:2021/1/14 21:35:06

 

細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:
96T
1 U/L - 40U/L
使用目的:
本試劑盒用于測定細(xì)菌樣本中亞硝酸鹽還原酶(NRase)活性。
細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書-價格/介紹-GIVEI生物
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)水平。用純化的細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入亞硝酸鹽還原酶(NRase),再與 HRP 標(biāo)記的亞硝酸鹽還原酶(NRase)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的亞硝酸鹽還原酶NRase)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)的活性濃度。
試劑盒組成
          30 倍濃縮洗滌液          20ml×1           7          終止液          6ml×1           
2          酶標(biāo)試劑          6ml×1                               8          標(biāo)準(zhǔn)品(80U/L          0.5ml×1           
3          酶標(biāo)包被板          12 孔×8                     9          標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液          1.5ml×1           
4          樣品稀釋液          6ml×1                     10          說明書          1           
5          顯色劑 A           6ml×1                     11          封板膜          2           
6          顯色劑 B           6ml×1/                    12          密封袋          1
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書-價格/介紹-GIVEI生物
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
40U/L           5 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20U/L          4 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10U/L          3 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0U/L          2 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5U/L          1 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶(NRase)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書-價格/介紹-GIVEI生物
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。次加樣時間好控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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