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技術文章

鹽酸克倫特羅Elisa檢測試劑盒-價格/說明-極威生物

點擊次數:17234   發(fā)布時間:2021/1/14 22:06:33

鹽酸克倫特羅檢測試劑盒
使用說明書
(酶聯(lián)免疫法)
1 原理及用途
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法檢測尿樣、組織、飼料 等樣本中的鹽酸克倫特羅(Clenbuterol,CLE),試劑盒由預 包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他 配套試劑組成。檢測時,加入標準品或樣品溶液,樣本中的鹽 酸克倫特羅和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗鹽酸克倫特羅 抗體,加入酶標記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光度值與其 所含鹽酸克倫特羅含量成負相關,與標準曲線比較即可得出樣 本中鹽酸克倫特羅的殘留量。
2 技術指標
2.1 試劑盒靈敏度:0.05ppb(ng/ml)
2.2 反應模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測下限:
尿液……………………………0.05ppb
組 織(處理法)……………0.2ppb
組 織(處理法二)……………0.05ppb
飼料……………………………0.5ppb
2.4 交叉反應率:
克倫特羅………………………100%
特普他林………………………<1%
馬布特羅………………………<1%
溴布特羅………………………<1%
沙丁胺醇………………………<1%
萊克多巴胺……………………<1%
2.5 樣本回收率:
尿樣……………………………95%±10%
組織、飼料……………………85%±15%
鹽酸克倫特羅Elisa檢測試劑盒-價格/說明-GIVEI生物
3 試劑盒組成
酶標板……………………………96 孔
標準液:各 1ml
0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb
高標準液(紅蓋):100ppb………1ml
酶標記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍蓋)………………5.5ml
底物液 A(白蓋)……………………6ml
底物液 B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X 濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
10X 復溶液(黃蓋)…………………50ml
說明書………………………………1 份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹干裝置、振蕩 器、離心機、刻度移液管、天平(感量 0.01g)
4.2 微量移液器:單道 20µl-200µl,100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 試劑:氫氧化鈉、乙酸乙酯、濃 HCl、乙腈、甲醇、正己 烷、無水硫酸鈉
鹽酸克倫特羅Elisa檢測試劑盒-價格/說明-GIVEI生物
5 樣本處理
5.1 樣本處理須知:
實驗器具必須潔凈并使用次性吸頭,以避免污染干擾實 驗結果。
5.2 配液:
配液 1:0.1M HCl 溶液
取 0.86ml 濃 HCl 加去離子水至 100ml。
配液 2:0.1M NaOH 溶液
稱取 0.4g NaOH 加去離子水至 100ml。
配液 3:乙腈-0.1M HCl 溶液
V 乙腈:V0.1M HCl =84:16。
配液 4:復溶液
將 10×復溶液用去離子水 10 倍稀釋,用于樣本的復溶, 復溶液在 4℃環(huán)境可保存?zhèn)月。
5.3 樣本處理步驟:
5.3.1 尿樣處理方法:
直接取 50µl 清亮尿樣進行測定(渾濁尿樣需要過濾或經 4000r/min 離心 5min,以得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應 冷凍保存。
尿樣本稀釋倍數:1
檢測下限:0.05ppb
5.3.2 組織樣本處理方法:
稱取均質后的組織樣本 2±0.05g ,加入 6ml 復溶液,充分 振蕩 2min,室溫 4000r/min 以上離心 10min (若組織樣本中油 脂含量較高,可在振蕩后放入 85℃水浴 10min 后再離心)。取 50µl 上清液進行分析。
樣本稀釋倍數:4
檢測下限:0.2ppb
5.3.3 組織樣本處理方法二:
1)稱取均質后的組織樣本 2±0.05g ,加入 6ml 乙腈-0.1M HCl, 充分振蕩 2min,室溫 4000r/min 以上離心 10min。
2)取上清液 3ml,加入 2ml 0.1M NaOH,加入 6ml 乙酸乙酯, 充分振蕩 2min,室溫 4000r/min 以上離心 10min,取全部上清 在 50-60℃條件下氮氣或空氣流吹至完全干燥;
3)加入 1ml 復溶液混合振蕩 30s,取 50µl 進行分析。
樣本稀釋倍數:1
檢測下限:0.05ppb
5.3.4 飼料樣本處理方法:
1)稱取均質后的飼料樣品 1.0±0.05g,加入 10ml 甲醇,再加 入 5g 無水硫酸鈉,振蕩 2min,室溫 4000r/min 以上離心 10min;
2)吸出離心后的上清液 1ml,于 50-60℃氮氣或空氣流吹干, 用 1 ml 復溶液溶解干燥的殘留物,再加入 1mL 正己烷混合 30s; 室溫 4000r/min 以上離心 5min。
3)取 50µl 下層進行分析。
樣本稀釋倍數:10
檢測下限:0.5ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從 4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡 30min 以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解, 每種液體試劑使用均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框 架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于 2-8℃。實驗開始,用去離子水將 20×濃縮洗滌液按 20 倍稀釋 成工作洗滌液。
6.1 號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本 和標準品做 2 孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應:加標準品或樣本 50µl/孔到各自的微孔中,然 后加酶標記物 50µl/孔,再加入 50µl/孔的抗體工作液,用蓋 板膜封板,輕輕振蕩 5 混勻,25℃反應 30 分鐘。
6.3 滌:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩干,用工作洗 滌液 250µl/孔充分洗滌 5 次,每次間隔 30 ,用吸水紙拍干 (拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 色:每孔加入底物液 A 50µl,再加底物液 B 50µl, 輕輕振蕩 5 混勻,25℃避光顯色 15 分鐘。
6.5 止:每孔加入終止液 50µl,輕輕振蕩混勻,終止反 應。
6.6 測吸光值:用酶標儀于 450nm 處測定每孔吸光度值(建議 用雙波長 450/630nm)。測定應在終止反應后 10 分鐘內完成。
7 結果分析
7.1 百分吸光率的計算
標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸 光度值的平均值(雙孔)除以第個標準液(0ppb)的吸光度 值,再乘以 100%,即 百分吸光度值(%)= A ×100% A0 A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 A0—0ppb 標準溶液的平均吸光度值 7.2 標準曲線的繪制與計算 以標準液百分吸光率為縱坐標,對應的標準液濃度(ppb) 的對數為橫坐標,繪制標準液的半對數曲線圖。將樣本的百分 吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃 度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實際濃度。 若利用試劑盒業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的 準確、快速分析。(歡迎來電索。
鹽酸克倫特羅Elisa檢測試劑盒-價格/說明-GIVEI生物
8 注意事項
8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導致 所有標準的 OD 值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會出現標準曲 線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行 下步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要徹底,在 ELISA 分析中的再現性,很 大程度上取決于洗板的致性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試 劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。0 標準的吸光 度值小于 0.5 個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質。
8.7 反應終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,避免冷凍。
保 質 期:該產品有效期為 1 年,生產日期見包裝盒。

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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