本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
豬萎縮性鼻炎抗原（atrophicrhinitis）ELISA 檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被豬萎縮性鼻炎抗原（atrophicrhinitis）捕獲抗體的包被微孔 中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底 洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并 在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬萎縮性 鼻炎抗原（atrophicrhinitis）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長 下測定吸光度（OD 值），判斷樣品是否含有豬萎縮性鼻炎抗原 （atrophicrhinitis）。
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樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細 胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心 地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘 取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按次用量分裝，凍存 于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
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操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解 后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保 存。
3. 預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取 10μL 加樣即可。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注
微孔酶標板 96 孔 48 孔 無
陰性對照 0.3mL 0.3mL 無
陽性對照 0.3mL 0.3mL 無樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無
底物 B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2 張 2 張 無
說明書 1 份 1 份 無
自封袋 1 個 1 個 無
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
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操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各 50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；
4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。
結(jié)果判斷
1.試驗有效性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。
2.臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3.陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4.陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性
試劑盒性能
1. 準確性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15，說明試驗結(jié)果有效。
2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
5. 有效期：6 個月
免責聲明
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2.嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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王小姐
