維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞

點(diǎn)擊次數(shù)：17229 發(fā)布時間：2021/5/26 21:50:21

維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞簡介

維生素B6試劑盒簡單易用，采用微生物方法，在微孔板種定量檢測食品、藥品和飼料中的維生素B6總量（包括添加和原生維生素B6）。所有所需的試劑均包含在試劑盒中。本試劑盒共能提供96次檢測（包括標(biāo)準(zhǔn)品）。使用ELISA reader (610 - 630 nm 或者540 - 550 nm)進(jìn)行讀數(shù)。

樣品處理：

液體樣品：無菌過濾、稀釋

固體樣品：均質(zhì)樣品、提�。x心）、無菌過濾和稀釋

含原生維生素B6的樣品處理：

固體樣品：均質(zhì)樣品、酸處理、提取（離心）、無菌過濾和稀釋

所需時間：試驗過程…….. …………………………………約60分鐘

評價時間…………………………………………….2分鐘

孵育：30 °C黑暗條件下44 – 48小時

標(biāo)準(zhǔn)品范圍：0.04－0.24 mg / 100g（ml）

回收率： 90－105％

Intra-assay CV for standards: < 10 %

Inter-assay CV for standards: < 10 %

1.產(chǎn)品用途

維生素B6微孔板檢測試劑盒是利用微生物方法，用于定量檢測食品、藥品和飼料中的維生素B6總量（包括添加和原生維生素B6）。本微生物檢測系統(tǒng)符合標(biāo)準(zhǔn)。

2. 檢測原理

維生素B6是從樣品稀釋提取所獲得的。將稀釋了的提取物和維生素B6檢測培養(yǎng)基加入包被有釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ATCC Nr. 9080)的微孔中。則釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的生長狀況取決于維生素B6的含量。添加維生素B6作為標(biāo)準(zhǔn)或者作為樣品混合物，細(xì)菌會一直生長直至維生素B6被消耗殆盡。孵育條件應(yīng)為37 °C黑暗條件下孵育44-48小時。細(xì)菌生長時新陳代謝的強(qiáng)度和維生素B6的含量形成關(guān)系并可以繪制稱標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過ELISA reader在610 - 630 nm (或者540 - 550 nm)讀取結(jié)果。

3.檢測說明

水質(zhì)在整個測試過程中起著十分重要的作用。本試劑盒中帶有作為溶劑的無菌蒸餾水，用于重組、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的提取。附加的蒸餾水在以上過程中都是必不可少的。

要求整個檢測過程中保持無菌操作。所使用的玻璃器皿保zheng無化學(xué)殘留物、清潔劑、化學(xué)物質(zhì)和微生物污染。因此，玻璃器皿使用先用3 mol / l的鹽酸漂洗，然后再用蒸餾水250 °C (482 °F)條件下加熱1小時。在使用回至室溫。

維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞樣品制備和提取
可以不用在無菌條件下進(jìn)行。樣品的過濾、稀釋與檢測的準(zhǔn)備工作則與整個檢測過程一樣必須在無菌條件下進(jìn)行。

檢測的每一個步驟都需要校正。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)該進(jìn)行3次檢測（注意：標(biāo)準(zhǔn)中推薦3次檢測方法）。未知樣品應(yīng)該用2份提取物的稀釋液檢測（誤差應(yīng)該小于10%）。如果在進(jìn)一步稀釋時檢出的維生素B6含量提高，則可能含有抑制劑，比如重金屬或者抗生素。

4. 提供試劑

每個試劑盒中包含足夠進(jìn)行96次試驗的材料和標(biāo)準(zhǔn)品

每個試劑盒中包含：

1 × 96孔微孔板，包被有釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ATCC Nr. 9080)

3 × 無菌蒸餾水 (30 ml) ，用于準(zhǔn)備培養(yǎng)基、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品提取稀釋液

3 × 維生素B6培養(yǎng)基 (固體)

3 × 維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品 (固體)

3 × 粘性箔

1 × 微孔板固定器

5. 需要試劑但試劑盒種不提供

−黑暗條件下的培養(yǎng)箱，30 °C

−90 -100 °C (194 - 212 °F)水浴，或者高壓滅菌鍋

−ELISA reader 610 - 630 nm (540 - 550 nm)

−pH 測量儀

−離心機(jī)，大約10000 × g

−刻度移液槍 20 - 200 µl; 100 - 1000 µl

−滅菌微量移液槍 tips 20 - 200 µl ａnd 100 - 1000 µl

−無菌試管 1.5 - 2.0 ml

−移液槍 5 or 10 ml

−帶帽的無菌離心機(jī)管 (15 ａnd 50 ml)

−帶無菌注射器的0.2 µm無菌濾膜

−雙蒸水用于樣品提取(available at ifp)

−0.1mol / l HCl

−2 mol / l NaOH (0.8 g 溶解于100 ml水中)

維生素B6試劑盒@熱點(diǎn)新聞檢測原生維生素B6所需試劑

- 1 mol / l 硫酸

- 氫氧化鈉溶液（100ml溶液中含40g）

6．用戶須知

−檢測培養(yǎng)基有可能刺激眼睛、皮膚和隔膜

−完成試驗后須根據(jù)規(guī)章處理檢測儀器（如使用高壓滅菌鍋）

7．貯藏條件

試劑盒應(yīng)存放在2－8℃條件下

處理過的試劑（標(biāo)準(zhǔn)品、培養(yǎng)基）和維生素B6緩沖液應(yīng)馬上使用，并在檢測后丟棄。

將未使用的微孔板條放回原來的箔袋中，并與干燥劑一起重新封好，放在2－8℃溫度下。微孔板須防止受潮或受到其他污染。

請勿在試劑盒標(biāo)注的保質(zhì)期之后使用。

8．試劑失效的跡象

空白的吸光度值大于標(biāo)準(zhǔn)品1。

濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值小于0.6（630nm）。

9．樣品處理

樣品應(yīng)儲存在4℃、避光條件下。

檢測富集營養(yǎng)樣品中的游離維生素B6時，熱水提取方法通常就足夠了。但是富集營養(yǎng)的飲料可以在過濾之后直接使用。由于使用熱水提取，所以原生維生素B6只能被部分檢測。對于檢測原生維生素B6總量，樣品應(yīng)用酸水解處理。

樣品提取時需要1g或1ml樣品溶解于40ml雙蒸水或提取溶液中。相當(dāng)于樣品的稀釋倍數(shù)為40，這個稀釋倍數(shù)已經(jīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)曲線中。

樣品提取后需要進(jìn)一步稀釋。稀釋倍數(shù)取決于由標(biāo)準(zhǔn)曲線中間部分顯示的標(biāo)準(zhǔn)濃度，它是除以其含量獲得（詳見產(chǎn)品標(biāo)簽或認(rèn)證，每100g或100ml濃度）。至于涉及到膠囊或藥片時，濃度時常表達(dá)為“/片膠囊”，此時濃度必須轉(zhuǎn)化成“/100g”（詳見11.的計算示例）。這個稀釋倍數(shù)在計算結(jié)果的時候必須考慮。

樣品提取時使用無菌濾膜（0.2μm）進(jìn)行過濾，此時。如果由于固體顆粒或者渾濁導(dǎo)致過濾不順利，則在無菌過濾之應(yīng)先離心（至少在8000g的離心力下離心5分鐘）。

樣品提取液可以在提取當(dāng)天使用，使用之應(yīng)避光保存。提取稀釋液應(yīng)馬上使用。

9.1.液體樣品（富含維生素的果汁、健康飲品）

加入1ml樣品至50ml無菌離心管中，準(zhǔn)que加入雙蒸水至40ml，搖勻。使用無菌0.2μm濾膜過濾1.0～1.5ml樣品到一個無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數(shù)）。

9.2.含維生素的可溶固體樣品（粉末、藥片）

稱取1g樣品至50ml無菌試管，加入30ml 0.1mol / l的鹽酸，振蕩至充分溶解，再用2mol / l 氫氧化鈉調(diào)整pH值至4.5～5.5。用雙蒸水準(zhǔn)que加至40ml刻度。用0.2μm無菌濾膜過濾1.0～1.5ml樣品至一無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數(shù)）。

9.3.維生素膠囊、藥片

先膠囊或藥片的重量必須確定（平均5～10個膠囊或藥片）。藥片用研缽或攪拌機(jī)均質(zhì)，膠囊須切開并取出其中的顆粒進(jìn)行試驗。

稱取1g藥片或切開1個膠囊至一個50ml無菌離心管中，用0.1mol / l的HCl加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取30分鐘。在提取時試管須振蕩至少5次。當(dāng)然期間必須bao證試管是否充分封閉。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l 的NaOH調(diào)整pH值至4.5～5.5。加無菌水精que至40ml。使用0.2μm無菌濾膜過濾1.0～1.5ml樣品至一個無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數(shù)）。

9.4 含維生素的谷物、嬰兒食品、面包、面粉、食品添加劑

均質(zhì)樣品，稱量1g樣品至一50ml離心管中，用0.1mol / l的HCl加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取30分鐘。在提取時試管須振蕩至少5次。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l 的NaOH調(diào)整pH值至4.5～5.5。加無菌水精que至40ml。使用0.2μm無菌濾膜過濾1.0～1.5ml樣品至一個無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數(shù)）。

9.5 原生維生素B6

提取復(fù)合物時，檢測含原生維生素B6的樣品必須先經(jīng)過用酸水化處理。稱量1g樣品至一50ml離心管中，用1.0mol / l的硫酸加至30ml，搖勻。在90～100℃水浴中提取6小時。在提取時試管須振蕩至少5次。迅速降溫至30℃以下。用2mol / l 的NaOH調(diào)整pH值至4.5～5.5。加無菌水精que至40ml。使用0.2μm無菌濾膜過濾1.0～1.5ml樣品至一個無菌試管中。是否進(jìn)一步稀釋則取決于濃度范圍（詳見計算示例中的稀釋倍數(shù)）。

10 檢測過程

10.1 準(zhǔn)備

裝有無菌水的瓶子：推開藍(lán)色帽，沿著玻璃邊緣垂直向上拉開，丟棄。

維生素B6培養(yǎng)基：足夠進(jìn)行至少6條微孔板試驗，培養(yǎng)基必須在試驗之新鮮制備。打開瓶蓋用鑷子從干燥劑中取出培養(yǎng)基，丟掉干燥劑。

－加入10ml無菌水（取自試劑盒中）至維生素B6培養(yǎng)基中

－蓋好培養(yǎng)基瓶，搖勻

－在90～100℃水浴中加熱至少5分鐘，期間振蕩至少5次；期間bao證瓶子封閉

－迅速冷卻至室溫（低于30℃）

－使用0.2μm無菌濾膜過濾培養(yǎng)基至15ml無菌離心管中

每個維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品都足夠進(jìn)行至少3個孔的試驗。標(biāo)準(zhǔn)品必須在試驗之新鮮制備。

－打開維生素維生素B6氫氯化物標(biāo)準(zhǔn)品瓶，取出蓋子。丟掉蓋子和紅色塞子

－加入x ml（x＝詳見質(zhì)量bao證書）無菌水（取自試劑盒）至標(biāo)準(zhǔn)品瓶中。用移液管溶解標(biāo)準(zhǔn)品：用標(biāo)準(zhǔn)品瓶中的水沖洗移液管尖數(shù)次＝標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液

－取6個無菌管（1.5～2.0ml）并按照下列表格準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線 mg/100g(ml)	無菌水 μl		標(biāo)準(zhǔn)濃縮液 μl		總體積 μl
空白：0	900	＋	0	＝	900
標(biāo)準(zhǔn)品1：0.002	900	＋	100	＝	1000
標(biāo)準(zhǔn)品2：0.004	400	＋	100	＝	500
標(biāo)準(zhǔn)品3：0.006	350	＋	150	＝	500
標(biāo)準(zhǔn)品4：0.008	300	＋	200	＝	500
標(biāo)準(zhǔn)品5：0.012	200	＋	300	＝	500

10.2.檢測過程

－用移液管吸取150μl維生素B6培養(yǎng)基至微孔中

－用移液管吸取150μl標(biāo)準(zhǔn)品貨樣品至指定的微孔中（用標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液沖洗移液管尖）

－用粘合箔蓋住微孔條或微孔：除去粘合箔上的保護(hù)層，將其平放在微孔條上，用手或壓舌板將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條。

注意：bao證粘合箔和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分

－在30℃黑暗條件下（可用孵育器）孵育44～48小時

10.3.測量

－再次向下擠壓粘合箔，將微孔板向上放置在桌面上，在桌面平面上振蕩，使微生物溶解在培養(yǎng)基中

－對角揭去粘合箔，從左邊開始進(jìn)行

－破壞微孔液體表面所有的泡沫（可以用移液管尖去除）

－用ELISA reader 610～630nm（或540～550nm）條件下讀取渾濁度

注意：

－當(dāng)孵育44～48小時后，微孔板能在冰箱里多儲存48小時，因此必須在這個時間段內(nèi)測量混濁度

－為了避免由于假期或zhou末所產(chǎn)生的時間上的損失，微孔板能在60小時之后進(jìn)行評估計算。推薦使用定時器在48小時之后關(guān)閉孵育器。

11.計算

推薦在計算結(jié)果時使用必發(fā)公司提供的配套軟件。

樣品稀釋倍數(shù)40已經(jīng)包括在標(biāo)準(zhǔn)曲線中。在下面的公式中，需要考慮提取的進(jìn)一步稀釋倍數(shù)和不同的樣品重量。

由于校準(zhǔn)過程中使用了維生素B6氫氯化合物，所以計算活性維生素B6還必須考慮0.822這個倍數(shù)。

液體樣品（富含維生素的果汁、健康飲品）

從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6 ＝ ──────────────────────

（mg/100ml）樣品總量（ml）

固體樣品（谷物、嬰兒食品、面粉、面包、添加物）

從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6＝ ────────────────────────

（mg/100g）樣品總量（g）

膠囊或藥片

從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6 ＝ ──────────────────────

（mg/100g）樣品總量（g）

從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取的濃度×藥片重量（g）×稀釋倍數(shù)×0.822

維生素B6＝ ──────────────────────────

（mg/藥片） 100×樣品總量（g）

樣品提取的稀釋倍數(shù)計算示例

提取液稀釋應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間區(qū)域。因此，濃度應(yīng)轉(zhuǎn)換為維生素B6鈣，并除以標(biāo)準(zhǔn)2

例a： 固體樣品，標(biāo)注濃度3mg / 100g

計算： 3mg×1.22 ÷ 0.004mg ＝915

→ 結(jié)果為稀釋倍數(shù)大約為1000

→ 1 ：1000 稀釋

1 ：1000

1 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），1 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），

1 ： 10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）。

例b： 藥片，標(biāo)注濃度3mg / 片

計算： 3mg×1.09 / 片，平均重量1g

＝ 300mg / 100g

300mg×1.22÷0.004mg ＝91500

→結(jié)果為稀釋倍數(shù)大約為90000

→1 ：90000稀釋

1 ：90000

1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml），1 ：10（0.1 ml ＋ 0.9 ml）

1 ：9（0.1 ml ＋ 0.8 ml）

原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司

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