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技術(shù)文章

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書

點(diǎn)擊次數(shù):16666   發(fā)布時(shí)間:2023/10/31 21:21:48

 主要用途

 

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑是一種旨在通過熒光染色劑二氯熒光乙酰乙酸鹽,受到活性氧的氧化下,產(chǎn)生熒光,來定量檢測活性氧族的生成和增加的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡易,性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

超氧自由基陰離子superoxide radical;O2-)、過氧化氫(hydrogen peroxideH2O2)、羥自由基或氫氧基hydroxyl radical;OH-)、過氧peroxyl radical;ROO-)、氫過氧自由基hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基nitric Oxide;NO-、過氧亞硝基陰離子peroxynitrite anion;ONOO-次氯酸hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基semiqui radical)、單線態(tài)氧氣(singlet oxygen等細(xì)胞內(nèi)活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。活性氧特異性探針熒光染料2',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽(2',7'-dichlorofluorescein diacetateDCFH-DA,一旦被過氧化氫、羥自由基或氫氧基、過氧、次氯酸氧化,便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定活性氧族的濃度。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

緩沖液(Reagent A    毫升

染色液(Reagent B    微升

稀釋液(Reagent C    毫升

產(chǎn)品說明書1份

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent B在-20冰箱里,嚴(yán)格避免光照;其余的保存在4冰箱里,有效bao6月

 

用戶自備

 

抗凝管:用于采血儲存的容器

15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管:用于樣品操作和工作液配制的容器

培養(yǎng)箱:用于反應(yīng)孵育

(微型)臺式離心機(jī):用于樣品操作

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于熒光定量分析

 

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 樣品準(zhǔn)備

 

選擇一:血漿樣品

1. 準(zhǔn)備好抗凝管(注意:避免使用EDTA抗凝管)

2. 抽取1毫升血液,置于抗凝管里

3. 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為700g(3000RPM,例如eppendorf 5415

4. 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層

5. 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存

6. 移取10微升上述制備的血漿到新的1.5毫升離心管

7. 加入xx微升緩沖液(Reagent A),混勻

8. 放在冰槽里待測

 

選擇二:血清樣品

1.準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲存管

2. 抽取1毫升血液,置于儲存管里

3. 室溫下,靜置30分鐘,直至血液凝結(jié)

4. 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心15分鐘,速度為2000g(5000RPM,例如eppendorf 5415

5. 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分(注意:避免觸碰白色液體層

6. 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存

7. 移取10微升上述制備的血清到新的1.5毫升離心管

8. 加入xx微升緩沖液(Reagent A),混勻

9. 放在冰槽里待測

 

選擇三:尿液/腦脊液/唾液/精液樣品 

1. 準(zhǔn)備好1.5毫升離心管

2. 移取1毫升液體到離心管

3. 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為700g(3000RPM,例如eppendorf 5415

4. 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管

5. 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存

6. 移取10微升到新的1.5毫升離心管

7. 加入xx微升緩沖液(Reagent A),混勻

8. 放在冰槽里待測

 

選擇四:細(xì)胞培養(yǎng)上清

1. 準(zhǔn)備1瓶25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶的新鮮待測細(xì)胞

2. 小心移取細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管

3. 放進(jìn)4臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為300g

4. 小心移取上清液到新的15毫升錐形離心管

5. 移取10微升到新的1.5毫升離心管

6. 加入xx微升緩沖液(Reagent A),混勻

7. 放在冰槽里待測

8. 放進(jìn)37培養(yǎng)箱里備用(1小時(shí)內(nèi))

二、 樣品測定

 

實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B置入冰槽里融化,稀釋液(Reagent C放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液(Reagent B到新的1.5毫升離心管,加入xx微升稀釋液(Reagent C,混勻后,標(biāo)記為染色工作液,置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

 

1. 準(zhǔn)備1個(gè)96孔板

2. 加入100微升上述制備的待測樣品

3. 加入xx微升染色工作液

4. 輕輕搖動(dòng)96孔板,混勻

5. 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育20分鐘

6. 即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀檢測:激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長530nm――RFU增高,表明活性氧族(ROS)含量高

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為50次操作

2. 操作時(shí),須戴手套

3. 孵育時(shí),避免光照

4. 測試前,細(xì)胞培養(yǎng)液須新鮮收集,1小時(shí)內(nèi)為zui

5. 培養(yǎng)液上清須澄清

6. 如果測定體系變化,則試劑用量相應(yīng)變化

7. 建議染色完成后,即刻進(jìn)行熒光分析 

8. 用戶可以使用維生素E作為陰性對照

9. 本公司同時(shí)提供體液活性氧高質(zhì)熒光測定試劑盒(G&VS10016.11),滿足不同用戶需求

10. 本公司提供系列活性氧分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

 

使用cheng

 

極威生物秉著信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量cheng的宗旨為我們的用戶提供you質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,bao說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請立即以書面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

 

友情提醒

 

IF IT DOESN’T WORK RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購信息

 

編號名稱規(guī)格

G&VS10016.12體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS初級熒光測定試劑盒50

G&VS10016.12A清理液(Reagent A毫升

G&VS10016.12B 染色液(Reagent B

G&VS10016.12C 稀釋液(Reagent C毫升

 

產(chǎn)品編號

名稱

規(guī)格

G&VS10016.12

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測定試劑盒

20次

G&VS10016.2

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒

100次

G&VS10016.3

活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測定試劑盒

8/20次

G&VS10016.4

活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒

40/100次

G&VS10016.5

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測定試劑盒

50次

G&VS10016.6

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒

50次

G&VS10016.7

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測定試劑盒

20次

G&VS10016.8

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級綠色熒光測定試劑盒

50次

G&VS10016.9

植物細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒

20次

G&VS10016.10

植物細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒

50次

G&VS10016.11

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒

50次

G&VS10016.12

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒

50次

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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