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主要用途
活體細(xì)胞線粒體chang期跟蹤試劑是一種旨在通過特異性染色劑與線粒體膜心磷脂的結(jié)合以及長qi 保留熒光特性來實時跟蹤活體細(xì)胞線粒體,且評價其活力變化的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級 科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。可以被用于線粒體的活力動態(tài)觀察, 以及細(xì)胞凋亡、信號傳遞、衰老、 代謝和營養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
心磷脂(Cardiolipin) 是線粒體膜上的主要成分。線粒體脂類分解, 致使心磷脂顯著減少, *終造成線 粒體的活力減弱、嚴(yán)重?fù)p害,直至裂解。 Nonyl-Acrydine Orange是一種可自由通過細(xì)胞膜的染色劑,特異 性地染色線粒體上的心磷脂,長達(dá)10天保留在細(xì)胞體內(nèi)而不釋放,并發(fā)出熒光。一旦線粒體受到損害或活 力減弱,其熒光顯著減弱。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A)
染色液(Reagent B)
稀釋液(Reagent C)
保存液(Reagent D)
產(chǎn)品說明書
保存方式
保存在-20℃冰箱里,有效bao證 6 月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024):用于細(xì)胞脫離
wan全細(xì)胞培養(yǎng)液(G&VS12052):用于細(xì)胞操作所需的培養(yǎng)基
15 毫升錐形離心管:用于細(xì)胞操作的容器
1.5 毫升離心管:用于細(xì)胞染色的容器
血細(xì)胞計數(shù)儀:用于細(xì)胞計數(shù)
臺式離心機(jī):用于沉淀細(xì)胞
細(xì)胞流式儀:用于細(xì)胞熒光分析
熒光顯微鏡:用于觀察熒光細(xì)胞
實驗步驟
一、 貼壁細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)染色
實驗開始前, 將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 并放在暗室里。 清理液(Reagent A) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。
1. 準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的待測細(xì)胞,細(xì)胞鋪滿率達(dá) 70%
(注意: 可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項 6)
2. 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
3. 輕輕沿著孔壁加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan全細(xì)胞培養(yǎng)液到細(xì)胞培養(yǎng)孔,覆蓋培養(yǎng)孔表面
4. 輕輕加入XXX微升 染色液(Reagent B),輕輕搖動培養(yǎng)板,使其混勻
5. 放進(jìn) 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育 20 分鐘
6. 小心抽去含有 染色液(Reagent B) 的細(xì)胞培養(yǎng)液
7. 輕輕沿著孔壁加入 1 毫升 37℃預(yù)熱的 清理液(Reagent A) 到細(xì)胞培養(yǎng)孔
8. 小心抽去 清理液(Reagent A)
9. 輕輕沿著孔壁加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan全細(xì)胞培養(yǎng)液到細(xì)胞培養(yǎng)孔,繼續(xù)培養(yǎng)
10.在倒置熒光顯微鏡下(10 天內(nèi))進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm (線粒體 呈紅色)-熒光減弱,表明線粒體活力減弱
二、 貼壁細(xì)胞快速染色
實驗開始前, 將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 并放在暗室里。 清理液(Reagent A) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。
1.準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的待測細(xì)胞,細(xì)胞鋪滿率達(dá) 70%
(注意: 可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項 6)
2.直接加入XXX微升(1:100 容量比) 染色液(Reagent B),輕輕搖動培養(yǎng)板,使其混勻
3.放進(jìn) 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育 20 分鐘
4.小心抽去含有 染色液(Reagent B) 的細(xì)胞培養(yǎng)液
5.輕輕沿著孔壁加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan全細(xì)胞培養(yǎng)液到細(xì)胞培養(yǎng)孔,繼續(xù)培養(yǎng)
6.在倒置熒光顯微鏡下(10 天內(nèi))進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm (線粒體 呈紅色)-熒光減弱,表明線粒體活力減弱
三、懸浮細(xì)胞染色
實驗開始前, 將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 并放在暗室里。 清理液(Reagent A) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。
1.準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的待測懸浮細(xì)胞
(注意: 可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項 6)
2.直接加入 5 微升(1:100 容量比) 染色液(Reagent B),輕輕搖動培養(yǎng)板,使其混勻
3.放進(jìn) 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育 20 分鐘
4.放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 1 分鐘,速度為 300g (或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)
5.小心抽去上清液
6.加入 XXX微升 37℃預(yù)熱的 清理液(Reagent A),混勻
7.放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 1 分鐘,速度為 300g (或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)
8.小心抽去上清液
9.加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan全細(xì)胞培養(yǎng)液,混勻
10.轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的培養(yǎng)孔里,繼續(xù)培養(yǎng)
11.在倒置熒光顯微鏡下(10 天內(nèi))進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm (線粒體 呈紅色)-熒光減弱,表明線粒體活力減弱
四、脫離細(xì)胞染色
實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 稀釋液
(Reagent C) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出XXX微升 染色液(Reagent B) 到新的 1.5
毫升離心管, 加入XXX微升 稀釋液(Reagent C),混勻后,將 染色工作液置入暗室里。
然后進(jìn)行下列操作。
1.準(zhǔn)備 1 瓶 25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶的待測細(xì)胞
2.小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
3.加入 XXX毫升 清理液(Reagent A) 到細(xì)胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面
4.小心抽去 清理液(Reagent A)
5.加入 1 毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面
6.置入 37℃培養(yǎng)箱 1 分種
7.輕輕抖動培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫落
8.加入 4 毫升用戶自備的wan全細(xì)胞培養(yǎng)液
9.移入 15 毫升錐形離心管,充分混勻
10.移取 10 微升在血細(xì)胞計數(shù)儀上進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)
11.移出 1 X 106 細(xì)胞到新的 15 毫升錐形離心管
12.放進(jìn)臺式離心機(jī)離心 5 分鐘,速度為 300g
13.小心抽去上清液
14.加入XXX毫升含有 染色液(Reagent B) 和 稀釋液(Reagent C) 的 染色 工作液,輕柔混勻
15.放進(jìn) 37℃恒溫水槽孵育 20 分鐘
16.放進(jìn)臺式離心機(jī)離心 5 分鐘,速度為 300g
17.小心抽去上清液
18.加入預(yù)冷的XXX微升 保存液(Reagent D),輕柔混勻細(xì)胞顆粒群
19.放進(jìn)冰槽里
20.即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析:波長 580nm,觀察 50000 個細(xì)胞以上 ――波峰左移,表明線粒體活力減弱 或在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm (線粒體呈紅色) - 熒光減弱,表明線粒體活力減弱
注意事項
1.本產(chǎn)品為 200 次操作(100 微升處理液總量)和 20 次操作(1 毫升處理液總量)
2.所有操作均須無菌狀態(tài)下進(jìn)行
3.操作時,須戴手套
4. 孵育時,必須避免光照
5.染色后 10 天內(nèi)可進(jìn)行細(xì)胞流式儀或熒光顯微鏡分析
6.本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng): 載玻片, 載玻片培養(yǎng)皿, 35mm 培養(yǎng)皿, 和各種培養(yǎng)孔板, 須相應(yīng)調(diào) 整處理液和染色液:
操作容器 | 建議處理液規(guī)格 | 染色液(Reagent B) |
載玻片 | 微升 | 微升 |
載玻片培養(yǎng)皿 | 毫升 | 微升 |
35mm 培養(yǎng)皿 | 毫升 | 微升 |
96 孔培養(yǎng)板 | 微升 | 微升 |
48 孔培養(yǎng)板 | 微升 | 微升 |
24 孔培養(yǎng)板 | 微升 | 微升 |
12 孔培養(yǎng)板 | 毫升 | 微升 |
6 孔培養(yǎng)板 | 毫升 | 微升 |
25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 毫升 | 微升 |
7 .本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1 .本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2 .本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
使用cheng諾
極威生物秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量cheng諾”的宗旨為我們的用戶提供you質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨 后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定, bao證說明書所述的使用效果。在貨到后 10 天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題, 請立即以書面形式(實驗報 告)與本公司聯(lián)系, 并將該產(chǎn)品退回, 經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致, 本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤 操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK , RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
產(chǎn)品編號 | 名稱 | 規(guī)格 |
G&VS10006. 1 | 動物細(xì)胞/組織線粒體粗提分離試劑盒 | 10/50 次 |
G&VS10006.2 | 動物細(xì)胞/組織活性線粒體分離試劑盒 | 10/50 次 |
G&VS10006.3 | 動物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10006.4. 1 | 動物硬組織線粒體粗提分離試劑盒 | 50 次 |
G&VS10006.4.2 | 動物硬組織活性線粒體分離試劑盒 | 50 次 |
G&VS10006.4.3 | 動物硬組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10013. 1 | 純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 | 100 次 |
G&VS10013.2 | 活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10013.3 | wan全線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10013.4 | 活體組織線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 | 10 次 |
G&VS10013.5 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10014. 1 | 線粒體外膜功能檢測試劑盒 | 20 次 |
G&VS10014.2 | 純化線粒體細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10014.3 | 細(xì)胞/組織懸液細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10014.4 | 純化細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10014.5 | 真菌/酵母細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10014.6 | 植物細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10015 | 線粒體功能詹納斯綠 B (JGB)染色試劑盒 | 20 次 |
G&VS10016. 1 | 細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10016.2 | 細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 | 100 次 |
G&VS10016.3 | 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒 | 8/20 次 |
G&VS10016.4 | 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 | 40/100 次 |
G&VS10016.5 | 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒 | 50 次 |
G&VS10016.6 | 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 | 50 次 |
G&VS10016.7 | 真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 高質(zhì)熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10016.8 | 真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 初級熒光測定試劑盒 | 50 次 |
G&VS10067. 1 | 活體細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)染色試劑盒 | 100 次 |
G&VS10067.2 | 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)染色試劑盒 | 100 次 |
G&VS10067.3 | 活體細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法定量檢測試劑盒 | 100 次 |
G&VS10111. 1 | 細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)紅色熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10111.2 | 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)紅色熒光測定試劑盒 | 50 次 |
G&VS10112. 1 | 動物細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10112.2 | 純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10112.3 | 精子細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10112.4 | 真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10113. 1 | 動物細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10113.2 | 純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10113.3 | 精子細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10113.4 | 真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10104. 1 | 純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10104.2 | 純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10104.3 | 膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10104.4 | 呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10104.5 | 膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10104.6 | 呼吸鏈依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10017. 1 | 活體細(xì)胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒 | 20/200 次 |
G&VS10017.2 | 純化線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒 | 20/200 次 |
G&VS10017.3 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒 | 20/200 次 |
G&VS10018 | 純化線粒體溶解試劑盒 | 20 次 |
G&VS10019. 1 | 活體細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 100/200 次 |
G&VS10019.2 | 植物組織線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 20 次 |
G&VS10019.3 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 100 次 |
G&VS10019.4 | 純化線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 100 次 |
G&VS10020. 1 | 活體細(xì)胞線粒體跟蹤試劑盒 | 100 次 |
G&VS10020.2 | 活體細(xì)胞線粒體chang期跟蹤試劑盒 | 20 次 |
G&VS20023.2 | 全血線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 10/20 次 |
G&VS20023. 1 | 純化線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 20 次 |
G&VS20023.3 | 細(xì)胞/組織線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 20 次 |
G&VS20023.4 | 細(xì)胞/組織基因組/線粒體 DNA 同步萃取試劑盒 | 10/20 次 |
G&VS20023.5 | 動物血小板線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 10/20 次 |
G&VS20023.6 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 10/20 次 |
G&VS20023.7. 1 | 通用型植物線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 10/20 次 |
G&VS20023.7.2 | 高多糖/酚植物線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 10/20 次 |
G&VS20023.8 | 動物硬組織線粒體 DNA 萃取試劑盒 | 10/20 次 |
G&VS10047 | 非突觸體腦組織線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10048. 1 | 植物線粒體粗提分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10048.2 | 植物活性線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10048.3 | 植物高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10049. 1 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體粗提分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10049.2 | 真菌/酵母細(xì)胞活性線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10049.3 | 真菌/酵母細(xì)胞高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10050. 1 | 細(xì)胞 ATP 生物發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10050.2 | 組織 ATP 生物發(fā)光法定量檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS10059 | 純化線粒體蛋白質(zhì)濃度定量測定試劑盒 | 20 次 |
G&VS10062. 1 | 動物血小板線粒體粗提分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10062.2 | 動物血小板活性線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10062.3 | 動物血小板高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10099. 1 | 動物全血線粒體粗提分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10099.2 | 動物全血活性線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS10099.3 | 動物全血高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 | 10 次 |
G&VS50001 | 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒 | 50 次 |
G&VS50003.2 | 線粒體超氧化物歧化酶(Mn/Fe SOD)分離試劑盒 | 50 次 |
G&VS50004 | 超氧化物歧化酶(SOD)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定試劑盒 | 5 次 |
G&VS30034. 1 | 純化線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒 | 20 次 |
G&VS30034.2 | 細(xì)胞/組織線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒 | 20 次 |
G&VS30034.3 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒 | 20 次 |
G&VS30034.4 | 植物線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒 | 20 次 |
G&VS30034.5 | 全血線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒 | 20 次 |
G&VS30034.6 | 動物血小板線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒 | 20 次 |
G&VS50005 | NADH 活性定量檢測試劑盒 | 20/80 次 |
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原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司
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