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技術(shù)文章

活體細(xì)胞線粒體長qi跟蹤試劑盒產(chǎn)品說明書

點(diǎn)擊次數(shù):16665   發(fā)布時間:2023/11/6 21:09:20

要用途

活體細(xì)胞線粒體chang跟蹤試劑是一種旨在通過特異性染色劑與線粒體膜心磷脂的結(jié)合以及長qi 保留熒光特性來實時跟蹤活體細(xì)胞線粒體,且評價其活力變化的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級 科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。可以被用于線粒體的活力動態(tài)觀察, 以及細(xì)胞凋亡、信號傳遞、衰老、 代謝和營養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定。

術(shù)背景

磷脂(Cardiolipin) 是線粒體膜上的主要成分。線粒體脂類分解, 致使心磷脂顯著減少, *終造成線 粒體的活力減弱、嚴(yán)重?fù)p害,直至裂解。 Nonyl-Acrydine Orange是一種可自由通過細(xì)胞膜的染色劑,特異 性地染色線粒體上的心磷脂,長達(dá)10天保留在細(xì)胞體內(nèi)而不釋放,并發(fā)出熒光。一旦線粒體受到損害或活 力減弱,其熒光顯著減弱。

產(chǎn)品內(nèi)容



清理液(Reagent A)

染色液(Reagent B)

稀釋液(Reagent C)

保存液(Reagent D)

產(chǎn)品說明書

 

保存方式

在-20℃冰箱里,有效bao 6 月

 

用戶自備

胰蛋白酶乙二胺四乙混合液(G&VS12024):用于細(xì)胞脫離

wan全細(xì)胞培養(yǎng)液(G&VS12052):用于細(xì)胞操作所需的培養(yǎng)基

15 毫升錐形離心管:用于細(xì)胞操作的容器

1.5 毫升離心管:用于細(xì)胞染色的容器

血細(xì)胞計數(shù)儀:用于細(xì)胞計數(shù)

臺式離心機(jī):用于沉淀細(xì)胞

細(xì)胞流式儀:用于細(xì)胞熒光分析

熒光顯微鏡:用于觀察熒光細(xì)胞


實驗步驟

、  貼壁細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)染色

實驗開始前, 將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 并放在暗室里。 清理液(Reagent A) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。

1.  準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的待測細(xì)胞,細(xì)胞鋪滿率達(dá) 70%

(意: 可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項 6)

2  小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液

3.  輕輕沿孔壁加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan細(xì)胞培養(yǎng)液到細(xì)胞培養(yǎng)孔,覆蓋培養(yǎng)孔表面

4.  輕輕加入XXX微升 染色液(Reagent B),輕輕搖動培養(yǎng)板,使其混勻

5  放進(jìn) 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育 20 分鐘

6.  小心去含有 染色液(Reagent B) 的細(xì)胞培養(yǎng)液

7.  輕輕沿著孔壁加入 1 毫升 37℃預(yù)熱的 清理液(Reagent A) 到細(xì)胞培養(yǎng)孔

8.  小心抽去 清理液(Reagent A)

9.  輕輕沿著孔加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan細(xì)胞培養(yǎng)液到細(xì)胞培養(yǎng)孔,繼續(xù)培養(yǎng)

10在倒置熒光顯微鏡下(10 天內(nèi))進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm  (線粒體 )-熒光減弱,表明線粒體活力減弱

 

、 貼壁細(xì)胞快速染色

實驗開始前, 將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 并放在暗室里。 清理液(Reagent A) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。

1準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的待測細(xì)胞,細(xì)胞鋪滿率達(dá) 70%

(意: 可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項 6)

2.直接加入XXX微升(1:100 容量比) 染色液(Reagent B),輕輕搖動培養(yǎng)板,使其混勻

3放進(jìn) 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育 20 分鐘

4.小心抽去含有 染色液(Reagent B) 的細(xì)胞培養(yǎng)液

5.輕輕沿著孔壁加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan細(xì)胞培養(yǎng)液到細(xì)胞培養(yǎng)孔,繼續(xù)培養(yǎng)

6在倒置熒光顯微鏡下(10 天內(nèi))進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm  (線粒體 )-熒光減弱,表明線粒體活力減弱

 

三、懸浮細(xì)胞染色

實驗開始前, 將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 并放在暗室里。 清理液(Reagent A) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽預(yù)熱。然后進(jìn)行下列操作。

1.準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的待測懸浮細(xì)胞

(意: 可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項 6)

2.直接加入 5 微升(1:100 容量比) 染色液(Reagent B),輕輕搖動培養(yǎng)板,使其混勻

3放進(jìn) 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育 20 分鐘

4.放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 1 分鐘,速度為 300g  (或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

 

5.小心抽去上清液

6.加入 XXX微升 37℃預(yù)熱的 清理液(Reagent A),混勻

7放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 1 分鐘,速度為 300g  (或 2000RPM,例如 eppendorf 5415)

8.小心抽去上清液

9.加入 500 微升 37℃預(yù)熱的用戶自備的wan細(xì)胞培養(yǎng)液,混勻

10.轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng) 24 孔板的培養(yǎng)孔里,繼續(xù)培養(yǎng)

11在倒置熒光顯微鏡下(10 天內(nèi))進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm  (線粒體 )-熒光減弱,表明線粒體活力減弱

 

四、脫離細(xì)胞染色

實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent B) 置入冰槽里融化, 稀釋液

(Reagent C) 放進(jìn) 37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出XXX微升 染色液(Reagent B) 到新的 1.5

毫升心管, 加入XXX微升 稀釋液(Reagent C),混勻后,將 染色工作液置入暗室里。

后進(jìn)行下列操作。

1.準(zhǔn)備 1 瓶 25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶的待測細(xì)胞

2小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液

3.加入 XXX毫升 清理液(Reagent A) 到細(xì)胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面

4.小心抽去 清理(Reagent A)

5加入 1 毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面

6.置入 37℃培養(yǎng)箱 1 分

7.輕輕抖動培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫

8加入 4 毫升用戶自備的wan細(xì)胞培養(yǎng)液

9移入 15 毫升錐形離心管,充分混勻

10移取 10 微升在血細(xì)胞計數(shù)儀上進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)

11.移出 1 X 106 細(xì)胞到新的 15 毫升錐形離心管

12.放進(jìn)臺式離心機(jī)離心 5 分鐘,速度為 300g

13.小心抽去上清

14.加入XXX毫升含有 染色液(Reagent B) 和 稀釋液(Reagent C) 的 染色 工作液,輕柔混

15.放進(jìn) 37℃恒溫水槽孵育 20 分鐘

16.放進(jìn)臺式離心機(jī)離心 5 分鐘,速度為 300g

17.小心抽去上清

18.加入預(yù)冷的XXX微升 保存液(Reagent D),輕柔混勻細(xì)胞顆粒群

19.放進(jìn)冰槽里

20.即刻進(jìn)行細(xì)流式儀分析:波長 580nm,觀察 50000 個細(xì)胞以上 ――波峰左移,表明線粒體活力減弱 或在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察(定性檢測):激發(fā)波長 580nm,散發(fā)波長 630nm (線粒體呈紅色) - 熒光減弱,表明線粒體活力減弱

 

注意事

1.本產(chǎn)品為 200 操作(100 微升處理液總量)和 20 次操作(1 毫升處理液總量)

2.所有操作均須無菌狀態(tài)下進(jìn)

3操作時,須戴手套

4. 孵育時,必須避免光

5.染色后 10 天內(nèi)可進(jìn)行細(xì)胞流式儀或熒光顯微鏡分析

6.本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的細(xì)胞培養(yǎng): 載玻片, 載玻片培養(yǎng)皿, 35mm 培養(yǎng)皿, 和各種培養(yǎng)孔板, 須相應(yīng)調(diào) 整處理液和染色液

操作容器

建議處理液規(guī)格

染色液(Reagent B)

載玻

微升

微升

載玻片培養(yǎng)皿

微升

35mm 培養(yǎng)皿

微升

96 孔培養(yǎng)板

微升

微升

48 孔培養(yǎng)板

微升

微升

24 孔培養(yǎng)板

微升

微升

12 孔培養(yǎng)板

微升

6 孔培養(yǎng)板

微升

25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶

微升

 

7 本公司提供系列線粒體分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

 

使用cheng

極威生物秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量cheng”的宗旨為我們的用戶提供you質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨 后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定, bao說明書所的使用效果。在貨到后 10 天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題, 請立即以書面形式(實驗報 )與本司聯(lián)系, 并將該產(chǎn)品退回, 經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致, 本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤 操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

情提醒

IF IT DOESNT WORK   RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

產(chǎn)品編號

名稱

規(guī)格

G&VS10006. 1

動物細(xì)胞/組織線粒體粗提分離試劑盒

10/50 次

G&VS10006.2

動物細(xì)胞/組織活性線粒體分離試劑盒

10/50 次

G&VS10006.3

動物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10006.4. 1

動物硬組織線粒體粗提分離試劑盒

50 次

G&VS10006.4.2

動物硬組織活性線粒體分離試劑盒

50 次

G&VS10006.4.3

動物硬組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10013. 1

純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒

100 次

G&VS10013.2

活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功/膜電位測定試劑盒

20 次

G&VS10013.3

wan全線粒體內(nèi)膜功/膜電位測定試劑盒

20 次

G&VS10013.4

活體組織線粒體內(nèi)膜功/膜電位測定試劑盒

10 次

G&VS10013.5

真菌/酵母細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒

20 次

G&VS10014. 1

線粒體外膜功能檢測試劑盒

20 次

G&VS10014.2

純化線粒體細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒

20 次

G&VS10014.3

細(xì)胞/組織懸液細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒

20 次

G&VS10014.4

純化細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒

20 次

G&VS10014.5

真菌/母細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒

20 次

G&VS10014.6

植物細(xì)胞色素 C 氧化酶活性測定試劑盒

20 次

G&VS10015

線粒體功能詹納斯綠 B  (JGB)染色試劑盒

20 次

G&VS10016. 1

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒

20 次

G&VS10016.2

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒

100 次

G&VS10016.3

活體織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒

8/20 次

G&VS10016.4

活體織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒

40/100 次

G&VS10016.5

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑

50 次

G&VS10016.6

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑

50 次

G&VS10016.7

/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 高質(zhì)熒光測定試劑盒

20 次

G&VS10016.8

/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 初級熒光測定試劑盒

50 次

G&VS10067. 1

體細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)染色試劑盒

100 次

G&VS10067.2

切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)染色試劑盒

100 次

G&VS10067.3

細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法定量檢測試劑盒

100 次

G&VS10111. 1

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)紅色熒光測定試劑盒

20 次

G&VS10111.2

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)紅色熒光測定試劑

50 次

G&VS10112. 1

物細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

G&VS10112.2

純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑

50 次

G&VS10112.3

子細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

G&VS10112.4

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

G&VS10113. 1

物細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

G&VS10113.2

純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑

50 次

G&VS10113.3

子細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

G&VS10113.4

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS) 光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

 

G&VS10104. 1

線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒

20 次

G&VS10104.2

線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒

20 次

G&VS10104.3

膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑

20 次

G&VS10104.4

呼吸鏈賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒

20 次

G&VS10104.5

膜電位依賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑

20 次

G&VS10104.6

呼吸鏈賴性純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒

20 次

G&VS10017. 1

體細(xì)胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒

20/200 次

G&VS10017.2

線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒

20/200 次

G&VS10017.3

/酵母細(xì)胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒

20/200 次

G&VS10018

純化線粒體溶解試劑

20 次

G&VS10019. 1

活體細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒

100/200 次

G&VS10019.2

植物組織線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒

20 次

G&VS10019.3

真菌/酵母細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒

100 次

G&VS10019.4

純化線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒

100 次

G&VS10020. 1

活體細(xì)胞線粒體跟蹤試劑盒

100 次

G&VS10020.2

活體細(xì)胞線粒體chang蹤試劑盒

20 次

G&VS20023.2

全血粒體 DNA 萃取試劑盒

10/20 次

G&VS20023. 1

純化線粒體 DNA 萃取試劑盒

20 次

G&VS20023.3

細(xì)胞/組織線粒體 DNA 萃取試劑盒

20 次

G&VS20023.4

細(xì)胞/組織基因組/線粒體 DNA 同步萃取試劑盒

10/20 次

G&VS20023.5

動物血小板線粒體 DNA 萃取試劑盒

10/20 次

G&VS20023.6

真菌/酵母細(xì)胞線粒體 DNA 萃取試劑盒

10/20 次

G&VS20023.7. 1

通用型植物線粒體 DNA 萃取試劑盒

10/20 次

G&VS20023.7.2

高多糖/酚植物線粒體 DNA 萃取試劑盒

10/20 次

G&VS20023.8

動物硬組織線粒體 DNA 萃取試劑盒

10/20 次

G&VS10047

非突觸體腦組織線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10048. 1

植物線粒體粗提分離試劑盒

10 次

G&VS10048.2

植物活性線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10048.3

植物高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10049. 1

真菌/酵母細(xì)胞線粒體粗提分離試劑盒

10 次

G&VS10049.2

真菌/酵母細(xì)胞活性線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10049.3

真菌/酵母細(xì)胞高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10050. 1

細(xì)胞 ATP 生物發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

G&VS10050.2

組織 ATP 生物發(fā)光法定量檢測試劑盒

50 次

G&VS10059

純化線粒體蛋白質(zhì)濃度定量測定試劑盒

20 次

G&VS10062. 1

動物血小板線粒體粗提分離試劑盒

10 次

G&VS10062.2

動物血小板活性線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10062.3

動物血小板高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10099. 1

動物全血線粒體粗提分離試劑盒

10 次

G&VS10099.2

動物全血活性線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS10099.3

動物全血高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒

10 次

G&VS50001

超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑

50 次

 

G&VS50003.2

線粒體超氧化物歧化酶(Mn/Fe SOD)分離試劑盒

50 次

G&VS50004

化物歧化酶(SOD)標(biāo)準(zhǔn)曲線測定試劑盒

5 

G&VS30034. 1

純化線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒

20 次

G&VS30034.2

細(xì)胞/組織線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒

20 次

G&VS30034.3

真菌/酵母細(xì)胞線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒

20 次

G&VS30034.4

植物線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒

20 次

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G&VS50009

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原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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