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點(diǎn)擊次數(shù)：1181 發(fā)布時(shí)間：2016/4/12 15:25:24
ELISA實(shí)驗(yàn)中，不同的檢測(cè)標(biāo)本的制備與貯存方法也不同，接下來(lái)，我們總結(jié)下常見(jiàn)的集中標(biāo)本的制備與貯存方法，供大家參考：
檢測(cè)可溶性蛋白：根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書制備血清、血漿標(biāo)本，由于有些樣品對(duì)溫度敏感極易喪失活性，應(yīng)盡快分離并分裝（一般300～500ul/管），大多數(shù)標(biāo)本收集和實(shí)驗(yàn)在同一天應(yīng)貯存在2～8℃。若無(wú)法立即測(cè)定，應(yīng)貯存在-70℃，標(biāo)本貯存時(shí)間一般不宜過(guò)長(zhǎng)，避免反復(fù)凍融。使用前將標(biāo)本平衡至室溫，融化標(biāo)本嚴(yán)禁使用水浴鍋。凍存后或冷藏時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的標(biāo)本可能會(huì)出現(xiàn)沉淀或小凝集塊，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前離心或過(guò)濾（0.45um濾膜）標(biāo)本，體積少的標(biāo)本不建議過(guò)濾。所有標(biāo)本的收集要使用無(wú)菌管，在無(wú)菌/半無(wú)菌條件下操作防止污染。
血清：將血液在室溫凝集10～15分鐘，1500g離心20～30分鐘，小心吸取血清。
血漿：按試劑盒中的說(shuō)明書選擇抗凝劑。收集血液時(shí)，輕輕搖動(dòng)試管使抗凝劑與血液充分混合。將血液在室溫保存 10～15分鐘，1500g離心15～20分鐘，小心吸上層血漿。
尿液：將尿液收集在無(wú)菌的容器內(nèi)。1500g離心10～15分鐘或過(guò)濾（0.45um濾膜）去除雜質(zhì)。注意：對(duì)于尿液標(biāo)本實(shí)驗(yàn)的回歸系數(shù)可能發(fā)生變化。
細(xì)胞培養(yǎng)上清液：1500g離心10～15分鐘去除細(xì)胞和細(xì)胞殘?jiān)Ｈ羰褂贸Ｒ?guī)典型的培養(yǎng)基，應(yīng)制備兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，一條使用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液/或?qū)嶒?yàn)緩沖液配制標(biāo)準(zhǔn)品，另一條以細(xì)胞培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)品。若兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線的變化范圍在10%內(nèi)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可用任一曲線分析。
檢測(cè)細(xì)胞相關(guān)和細(xì)胞內(nèi)蛋白：細(xì)胞相關(guān)蛋白和其它細(xì)胞內(nèi)蛋白在ELISA實(shí)驗(yàn)前需要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理將目的蛋白釋放出來(lái)。
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