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試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA Ab)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底 物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用 下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA Ab)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度
-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
3.37℃恒溫箱
1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
3. 預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋,直接取 10μL 加樣即可。
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無(wú) |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL | 0.3mL | 無(wú) |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
檢測(cè)抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無(wú) |
說(shuō)明書 | 1 份 | 1 份 | 無(wú) |
自封袋 | 1 個(gè) | 1 個(gè) | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
2. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;
3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL;
4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
6. 每孔加入底物A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在 Excel 工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
更新時(shí)間:2024/5/24 11:45:35
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