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· 資料簡介： HOK 人正�？谇唤琴|(zhì)細胞 Catalogue No.: C1366 Product Format: a T25 flask Culture Properties：貼壁 Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% Application: Cells ａnd cancer research NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY. Components Item Specifications a T25 flask 2X106 Manual 1 copy Operation steps for cell culture 1. 吸走用于培養(yǎng)基，加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞； 2. 吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表 面，培養(yǎng)瓶放 37 度培養(yǎng)箱消化； （細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或 者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止 消化到細胞完全漂浮�；靹蚣毎麜r盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。） 3. 加入 6-8ml 完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻； 4. 將混勻的細胞 1000rpm（約 150g）離心 3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸 37 度培 養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)； 傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用 1:3-1:4 傳代，生長較慢的細胞可以 1:2 傳代。 Cell cryopreservation 1.凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇） 2.降溫步驟：4 度 10min，-20 度 2h，-80 過夜后液氮保存。Tips： 1. 細胞經(jīng)過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正�，F(xiàn)象。貼壁細胞 可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約 150g)離心 3min，棄上清。加 5ml PBS 重懸細胞，再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培 養(yǎng)瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略 PBS 重懸的步 驟；如果碎片很多，建議 PBS 多洗幾次。 2. 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。 3. 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（不超過 20%），也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài)， 選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。 4. 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min 均有可能，具體以細胞消化到 相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞完全漂浮。客戶消化過度導致細胞死 亡、漂浮、生長緩慢，不提供免費售后服務(wù)。 5. 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。若 客戶同時復蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費售后服務(wù)。 6. 細胞狀態(tài)正常時，應(yīng)盡快凍存細胞保種，凍存后應(yīng)隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍 存細胞導致死亡負責，客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務(wù)。 Notice：客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們，細胞收到后 1 周內(nèi)沒有任何電話，或其他形式回訪， 默認為細胞質(zhì)量沒問題，之后出了任何問題不給予免費售后。細胞免費售后只提供一次，若重發(fā)后再 次培養(yǎng)死亡不再免費補發(fā)，細胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。
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