禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞

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· 上傳者：上海極威生物科技有限公司

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· 所屬分類：應(yīng)用方法

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· 資料簡介：

11月9日報道，關(guān)于禽流感病毒（AIV）elisa試劑盒說明書@公司新聞介紹稱，本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷，檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被禽流感病毒抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中禽流感病毒（AIV）的存在與否。

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，樣品收集、處理及保存方法：

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于 -20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，自備物品：

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，操作步驟：

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各 50μL； 3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；

4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，結(jié)果判斷：

1. 試驗(yàn)有效性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。

2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3. 陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4. 陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，試劑盒性能：

準(zhǔn)確性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，結(jié)果有效。

1. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

2. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。

3. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

4. 有效期：6 個月

禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，免責(zé)聲明：

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

ELISA試劑盒用戶：為什么酶標(biāo)儀讀數(shù)時必須選用雙波長？

極威生物解答：首先，酶標(biāo)儀使用前務(wù)必預(yù)熱10-15min，使測讀結(jié)果更穩(wěn)定。其次，ELISA實(shí)驗(yàn)采用雙波長測定吸光度，可以排除單波長檢測時的測定干擾（標(biāo)本的濃度，干擾色等）。一般采用波長作為參照波長，在參照波長下，檢測物的吸光值*小，檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收；因此，雙波長測定，可限度的消除指紋、雜質(zhì)及不透光的物質(zhì)對酶標(biāo)儀讀數(shù)帶來的誤差，以保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。

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