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· 上 傳 者: 上海極威生物科技有限公司
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· 資料簡介: 11月9日消息,據(jù)極威生物報(bào)道,檢測人Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)的elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露介紹稱,本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人 Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)的含量。 l 有效期:6個月 l 保存條件:2-8℃ l 本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷 檢測人Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露,實(shí)驗(yàn)原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人Ⅳ型膠原蛋白 (Ⅳ-C)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并 徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 *終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波 長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。 檢測人Ⅳ型膠原蛋白(Ⅳ-C)的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露,樣本處理及要求: 1. 血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000 ×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞 會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體 積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。 推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組 織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘, 取上清檢測。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯?于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 注:標(biāo)本溶血會影響*后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。 ELISA試劑盒用戶:ELISA樣本保存有哪些影響? 極威生物解答:樣本的保存:在冰箱中保存過久的標(biāo)本,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、會造成假陽性;為避免上述問題,在ELISA試劑盒測定血清標(biāo)本時(shí)能新鮮采集;如果不能立即測定,根據(jù)相應(yīng)的時(shí)間保存相應(yīng)的溫度,5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)-20℃低溫凍存;如凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
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