全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

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· 資料簡介： 產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過組織內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá)，催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的組織細(xì)胞分布，作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識(shí)別和探測(cè)衰老組織的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動(dòng)物活體（in vivo）檢測(cè)。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感。

技術(shù)背景

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，尤其在酸性條件下，細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。全組織（WHOLE MOUNT或EN BLOC）原位染色時(shí)間真實(shí)反應(yīng)轉(zhuǎn)染效果，組織形態(tài)維持良好，同時(shí)后續(xù)使用石蠟切片存檔保存成為可能。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）毫升

固定液（Reagent B）毫升

酸性液（Reagent C）毫升

稀釋液（Reagent D）毫升

染色液（Reagent E）毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀釋液（Reagent D）和染色液（Reagent E），用鋁箔封裹，避免光照；有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液

恒溫培養(yǎng)箱：用于染色孵育

切片儀：用于石蠟或冰凍切片

光學(xué)顯微鏡：觀察染色后的組織細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液（Reagent D）到15毫升離心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混勻后，置入暗室里，室溫下，標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作：

1．準(zhǔn)備1個(gè)6孔細(xì)胞培養(yǎng)板

2．放進(jìn)新鮮切除的動(dòng)物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長；如果過大，刀切處理一下）

3．將組織壓平

4．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本

5．小心抽去清理液

6．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），浸沒整個(gè)組織

7．在4℃條件下孵育2小時(shí)

8．小心抽去固定液

9．小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗組織樣本

10．在室溫下孵育15分鐘

11．小心抽去凈化液

12．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至11一次

13．小心加入xx毫升染色工作液，浸沒整個(gè)組織

14．放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱，孵育16小時(shí)，避免光照

15．后續(xù)石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚）

16．在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：表達(dá)β- 半乳糖苷酶活性的組織為陽性，呈現(xiàn)藍(lán)色

注意事項(xiàng)

1．本產(chǎn)品為10次（10個(gè)樣本）操作

2．操作時(shí)須戴手套

3．使用時(shí)，避免污染母液，否則出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實(shí)驗(yàn)效果

4．原始組織大小可以1厘米厚、2厘米長進(jìn)行染色，但建議越小越佳

5．本產(chǎn)品的參數(shù)：固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達(dá)到*優(yōu)化

6． 染色工作液避免光照

7．用戶根據(jù)實(shí)際需求，按比例配制試劑用量

8．染色孵育過程，避免光照

9．組織β-半乳糖苷酶活性強(qiáng)，孵育3小時(shí)即顯示陽性；組織β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24小時(shí)

10．組織染色*長孵育時(shí)間為24小時(shí)

11．本產(chǎn)品染色敏感，甚至對(duì)于微弱表達(dá)的酶活性仍然顯色清晰；用戶可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整孵育時(shí)間和染色工作液濃度，使染色恰到好處

12．孵育時(shí)避免液體蒸發(fā)

13．組織呈現(xiàn)藍(lán)色的部位為衰老組織特異性β-半乳糖苷酶活性的地方

14．全組織染色存在其染色不均勻、組織內(nèi)部染色滲透困難等局限

15．染色后的后續(xù)處理的切片樣品可以長期保存，同樣須避免光照

16．本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主營產(chǎn)品有elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，動(dòng)物血清，細(xì)胞株，標(biāo)準(zhǔn)品，生化試劑盒等。

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)有酶聯(lián)免疫ELISA檢測(cè)、生化測(cè)試、液相氣相檢測(cè)、Icp-MS測(cè)試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線粒體測(cè)序、熒光定量PCR、基因克隆、定點(diǎn)突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測(cè)序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本，以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，以為客戶創(chuàng)造價(jià)值為己任的精神，致力于發(fā)展中國的科研事業(yè)。

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