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· 資料簡介: 主要用途 通用型細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑是一種旨在以X-Gal為底物,通過組織/細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達(dá),催化生成深藍(lán)色的沉積產(chǎn)物,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動物細(xì)胞、活體組織以及冰凍組織切片檢測。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,著色敏感。 技術(shù)背景 細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,尤其在酸性條件下,細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加,而成為細(xì)胞衰老的生物學(xué)標(biāo)記。 產(chǎn)品內(nèi)容 清理液(Reagent A) 毫升 固定液(Reagent B) 毫升 酸性液(Reagent C) 毫升 稀釋液(Reagent D) 毫升 染色液(Reagent E) 毫升 產(chǎn)品說明書 x1份 保存方式 保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;稀釋液(Reagent D)和染色液(Reagent E)用鋁箔封裹,避免光照;有效保證6月 用戶自備 2毫升離心管:用于配制染色工作液 15毫升錐形離心管:用于配制染色工作液 恒溫培養(yǎng)箱:用于染色孵育 切片儀:用于石蠟或冰凍切片 光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的細(xì)胞 實驗步驟 一、 細(xì)胞染色 操作一、25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶染色 實驗開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出,放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液(Reagent D)到2毫升離心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混勻后,放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作: 1. 小心抽去25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液 2. 小心加入xx毫升清理液(Reagent A),清洗生長中的細(xì)胞表面 3. 小心抽去清理液 4. 小心加入xx毫升固定液(Reagent B),覆蓋整個生長表面 5. 在室溫下孵育5分鐘 6. 小心抽去固定液 7. 小心加入xx毫升酸性液(Reagent C),清洗細(xì)胞表面 8. 小心抽去酸性液 9. 重復(fù)實驗步驟7和8兩次 10. 小心加入xx毫升預(yù)熱的染色工作液,覆蓋整個細(xì)胞表面 11. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱,孵育3小時至16小時,或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)) 12. 在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞,呈現(xiàn)藍(lán)色 操作二、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色 實驗開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出,放進(jìn)冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液(Reagent D)到15毫升錐形離心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混勻后,放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱,標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作: 1.小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液 2.每孔加入xx微升清理液(Reagent A),清洗生長中的細(xì)胞表面 3.小心抽去每孔里的清理液 4.每孔加入xx微升固定液(Reagent B),覆蓋整個生長表面 5.在室溫下孵育5分鐘 6.小心抽去固定液 7.每孔加入xx微升酸性液(Reagent C),清洗細(xì)胞表面 8.小心抽去酸性液 9.重復(fù)實驗步驟7和8一次 10.每孔加入xx微升預(yù)熱的染色工作液,覆蓋整個細(xì)胞表面 11.放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱,孵育3小時至16小時,或細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色(注意:避免液體蒸發(fā)) 12.在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù):表達(dá)衰老特異性β- 半乳糖苷酶的細(xì)胞為陽性細(xì)胞,呈現(xiàn)藍(lán)色 上海極威生物科技有限公司(Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.)成立于上海,主營產(chǎn)品有elisa試劑盒,大鼠elisa試劑盒,小鼠elisa試劑盒,動物血清,細(xì)胞株,標(biāo)準(zhǔn)品,生化試劑盒等。 實驗代做服務(wù)有酶聯(lián)免疫ELISA檢測、生化測試、液相氣相檢測、Icp-MS測試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線粒體測序、熒光定量PCR、基因克隆、定點突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本,以市場需求為導(dǎo)向,以為客戶創(chuàng)造價值為己任的精神,致力于發(fā)展中國的科研事業(yè)。
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