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· 資料簡(jiǎn)介： 主要用途 純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)高度敏感的陽(yáng)離子熒光羰花青染料結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強(qiáng)或減弱說(shuō)明線粒體膜電位的變化，即內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低，來(lái)分析線粒體內(nèi)膜功能的完整性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種線粒體制備物的功能檢測(cè)。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，活體檢測(cè)，操作極為簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定。 技術(shù)背景 陽(yáng)離子熒光染色劑羰花青（5,5＇,6,6＇-tetrachloro-1,1＇,3,3＇-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對(duì)膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進(jìn)入線粒體，分布和結(jié)合在線粒體基質(zhì)上。線粒體膜電位的高低變化決定了羰花青的分布濃度。電位高，羰花青形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之，則為綠色。熒光減弱表明線粒體內(nèi)膜功能受到損害。 產(chǎn)品內(nèi)容 保存液（Reagent A） 毫升 染色液（Reagent B） 微升 稀釋液（Reagent C） 毫升 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份 保存方式 保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保證12月 用戶自備 1.5毫升離心管：用于線粒體染色的容器 比色皿或96孔板：用于熒光定量的容器 （共聚焦）熒光顯微鏡：用于線粒體熒光定性分析 熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于線粒體熒光定量分析 實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent C）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent C），混勻后，在冰槽里靜置，并標(biāo)記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。 一、（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（大量檢測(cè)） 1． 從純化的線粒體樣品中移出至少含107細(xì)胞中提取的線粒體到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管，置入冰槽里 2． 加入適量的保存液（Reagent A）至*終容量為100微升（含有50微克線粒體蛋白質(zhì)為理想狀態(tài)） 3． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀釋液（Reagent C）的染色工作液，輕柔混勻 4． 放進(jìn)暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測(cè)前置于冰槽里） 5． 即刻移入到載玻片上 6． 放上蓋玻片，在（共聚焦）熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察（單濾波）： 觀察紅色熒光：濾波器激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)590nm或羅丹明（rhodamine）濾波器激發(fā)波長(zhǎng)540nm， 散發(fā)波長(zhǎng)570nm或德州紅（Texas Red）濾波器激發(fā)波長(zhǎng)590nm，散發(fā)波長(zhǎng)610nm―― 二、（共聚焦）熒光顯微鏡觀察（小量檢測(cè)） 1． 從純化的線粒體樣品中移出10微升純化線粒體（含有5微克線粒體蛋白為理想狀態(tài)）到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管，置入冰槽里 2． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀釋液（Reagent C）的染色工作液，輕柔混勻 3． 放進(jìn)暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測(cè)前置于冰槽里） 4． 即刻移入到載玻片上 5． 放上蓋玻片，在（共聚焦）熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察（單濾波）： 觀察紅色熒光：濾波器激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)590nm或羅丹明（rhodamine）濾波器激發(fā)波長(zhǎng)540nm， 散發(fā)波長(zhǎng)570nm或德州紅（Texas Red）濾波器激發(fā)波長(zhǎng)590nm，散發(fā)波長(zhǎng)610nm―― 三、熒光酶標(biāo)儀檢測(cè) 1． 分別加入xx微升含有染色液（Reagent B）和稀釋液（Reagent C）的染色工作液到96孔板的每個(gè)孔里 2． 加入10微升純化的線粒體樣品（含有5微克線粒體蛋白為理想狀態(tài)） 3． 輕輕搖勻96孔板 4． 放進(jìn)暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測(cè)前置于冰槽里） 5． 即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀測(cè)定（單一測(cè)定）： 激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)590nm，獲得相對(duì)熒光單位（RFU）： 三、熒光分光光度儀比色皿檢測(cè) 1． 從純化的線粒體樣品中移出至少含107細(xì)胞中提取的線粒體到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管，置入冰槽里 2． 加入適量的保存液（Reagent A）至*終容量為100微升（含有50微克線粒體蛋白為理想狀態(tài)） 3． 加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀釋液（Reagent C）的染色工作液到1毫升比色皿里（若使用2毫升比色皿，用量相應(yīng)加倍） 4． 加入100微升純化的線粒體樣品 5． 上下傾倒比色皿，輕輕混勻 6． 放進(jìn)暗室里，在室溫下孵育10分鐘（注意：檢測(cè)前置于冰槽里） 7． 即刻放進(jìn)熒光分光光度計(jì)測(cè)定（單一測(cè)定）： 激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)590nm，獲得相對(duì)熒光單位（RFU）： 訂購(gòu)信息 編號(hào)名稱規(guī)格 G&VS10013.1純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位熒光測(cè)定試劑盒10/100次 G&VS10013.1A保存液（Reagent A）5毫升 G&VS10013.1B 染色液（Reagent B） 500微升 G&VS10013.1C 稀釋液（Reagent C） 50毫升 G&VS12042纈氨霉素溶液（0.1 mM） 10毫升 G&VS30030.1 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒100次 產(chǎn)品編號(hào) 名稱 規(guī)格 G&VS10006.1 動(dòng)物細(xì)胞/組織線粒體粗提分離試劑盒 10/50次 G&VS10006.2 動(dòng)物細(xì)胞/組織活性線粒體分離試劑盒 10/50次 G&VS10006.3 動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 10次 G&VS10013.1 純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 100次 G&VS10013.2 活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10013.3 完全線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10013.4 活體組織線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 10次 G&VS10013.5 真菌/酵母細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10014.1 線粒體外膜功能檢測(cè)試劑盒 20次 G&VS10014.2 純化線粒體細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10014.3 細(xì)胞/組織懸液細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10014.4 純化細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10014.5 真菌/酵母細(xì)胞懸液細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10014.6 植物細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 20次 G&VS10015 線粒體功能詹納斯綠B（JGB）染色試劑盒 20次 G&VS10019.1 活體細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 100/200次 G&VS10019.2 植物組織線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 20次 G&VS10019.3 真菌/酵母細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 100次 G&VS10019.4 純化線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 100次
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